Analiza przeciwciał monoklonalnych (mAb) metodą LC-MS/MS – kompleksowa charakterystyka jakościowa leków biologicznych
Czym są przeciwciała monoklonalne i dlaczego ich analiza jest kluczowa?
Przeciwciała monoklonalne (mAbs) to nowoczesna klasa leków biologicznych wykorzystywanych w terapii chorób nowotworowych, autoimmunologicznych oraz zakaźnych. Dzięki wysokiej specyficzności i selektywności działania, przeciwciała te umożliwiają celowane leczenie z ograniczeniem działań niepożądanych.Ze względu na to, że są produkowane w żywych komórkach, proces ich wytwarzania jest złożony i wymaga rygorystycznej kontroli jakości. Nawet subtelne zmiany w strukturze białka mogą wpływać na jego skuteczność terapeutyczną, stabilność oraz bezpieczeństwo stosowania. Dlatego analiza przeciwciał monoklonalnych stanowi kluczowy element każdej fazy ich rozwoju, produkcji i oceny, zapewniając skuteczność, bezpieczeństwo oraz zgodność z wymaganiami agencji regulacyjnych
Krytyczne Atrybuty Jakościowe (CQA) – podstawa oceny mAb
Kluczowym elementem tego procesu jest identyfikacja i monitorowanie Krytycznych Atrybutów Jakościowych (CQA) czyli właściwości fizykochemicznych, biologicznych i strukturalnych, które mają istotny wpływ na jakość, bezpieczeństwo oraz skuteczność produktu biologicznego. Ocena CQA jest wymagana przez agencje regulacyjne, takie jak EMA i FDA, zgodnie z wytycznymi ICH Q6B. DO najważniejszych parametrów CQA należą:
- sekwencja aminokwasowa (potwierdzenie struktury pierwotnej),
- masa cząsteczkowa,
- modyfikacje potranslacyjne (np. glikozylacja, oksydacja, deamidacja i kilkadziesiąt innych),
- zanieczyszczenia procesowe (np. białka HCP – host cell proteins),
- stabilność strukturalna.
Szczegółowa analiza tych parametrów metodami MAM (Multiple Attribution Monitoring) pozwala na zapewnienie zgodności z lekiem referencyjnym, ocenę porównawczą partii produkcyjnych (lot-to-lot) oraz optymalizację procesu wytwarzania.
Nasza oferta – charakterystyka przeciwciał monoklonalnych LC-MS/MS
W naszym laboratorium wykonujemy kompleksowe analizy przeciwciał monoklonalnych (mAb) z wykorzystaniem spektrometrii mas LC-MS/MS. Pracujemy na aparacie wysokiej rozdzielczości ZenoTOF 7600 (SCIEX), stosując zaawansowane techniki fragmentacji: CID (Collision-Induced Dissociation) oraz EAD (Electron-Activated Dissociation). Dane analizujemy przy użyciu dedykowanego oprogramowania: Biologics Explorer, Sciex OS, Skyline, Spectronaut, PEAKS Studio.
Zakres naszych analiz LC-MS/MS:
1. Mapowanie peptydowe
- Analiza sekwencji aminokwasowej oraz potwierdzanie pełnej sekwencji białka.
- Wysokie pokrycie sekwencji dzięki zastosowaniu proteaz (np. trypsyny).
2. Analiza strukturalna – analiza wiązań disiarczkowych
- Potwierdzenie obecności oczekiwanych wiązań disiarczkowych.
- Identyfikacja lokalizacji mostków disiarczkowych, w tym nieznanych i niepożądanych miejsc ich tworzenia w strukturze białka, możliwa jest dzięki zastosowaniu techniki fragmentacji EAD.
3. Charakterystyka modyfikacji potranslacyjnych (PTMs)
- Wykrywanie i lokalizacja modyfikacji takich m.in: glikozylacja, fosforylacja, oksydacja, deamidacja, acetylacja i wiele innych.
- Określenie zawartości procentowej PTMs.
4. Analiza profilu N-glikanów
Glikozylacja to jedna z kluczowych modyfikacji wpływających na stabilność, strukturę oraz aktywność biologiczną przeciwciał monoklonalnych. Z tego względu szczegółowa analiza profilu N-glikozylacji stanowi ważny element charakterystyki jakościowej mAb. Analiza gallikanów obejmuje:
- Analizę formy glikozylowanej i deglikozylowanej oraz po redukcji mostków disiarczkowych
- Lokalizacja typowych i nietypowych miejsc glikozylacji dzięki EAD (Electron-Activated Dissociation).
- Zastosowanie w badaniach biosymilarności oraz na etapie rozwoju produktu
5. Site occupancy
- Ocena stopnia obsadzenia miejsc glikozylacji czyli procent cząsteczek białka w próbce, które są glikozylowane w danym miejscu.
- Parametr ten ma istotny wpływ na strukturę, stabilność, funkcję oraz immunogenność białka.
6. Intact Protein Analysis – analizę masy całkowitej białka
- Precyzyjne wyznaczenie masy całej cząsteczki mAb.
- Weryfikacja zgodności z masą teoretyczną.
7. Badanie TiPOS (Technical Proof of Similarity)
- Porównanie białka zsyntetyzowanego (z różnych LOT-ów) z białkiem referencyjnym.
- Wsparcie dla badań porównawczych leków biopodobnych.
Dlaczego warto współpracować z naszym laboratorium?
- Nowoczesna aparatura i specjalistyczne oprogramowanie,
- Doświadczony zespół z wieloletnim doświadczeniem w analizie białek,
- Możliwość dopasowania zakresu analiz do potrzeb klienta.
Skontaktuj się z nami
Skontaktuj się z nami, aby uzyskać bezpłatną wycenę i dowiedzieć się, jak możemy wesprzeć Twój projekt. Oferujemy wysoko specyficzną i czułą analizę przeciwciał monoklonalnych techniką LC-MS/MS, która pozwoli Ci zadbać o bezpieczeństwo, skuteczność i zgodność z wymaganiami regulacyjnymi Twojego produktu biologicznego.
